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ELISA試劑盒的解決辦法

點擊次數:1094 更新時間:2016-09-30

ELISA試劑盒的解決辦法
血清是zui常用的人ELISA試劑盒標本,血漿一般可視為與血清同等的標本,標本引起的假陽性和假陰性結果主要是干擾性物質所致,分為內源性物質和外源性物質兩種,本文主要為大家介紹內源性物質:
    內源性物質: 有人認為大約40%的人血清標本中含有非特異性干擾物質,可以不同程度影響檢測結果。常見的干擾物質有:類風濕因子、補體、嗜異性抗體、嗜靶抗原自身抗體、醫(yī)源性誘導的抗鼠Ig (s)抗體、交叉反應物質和其它物質等。
(1)類風濕因子
人血清中IgM、IgG型類風濕因子(RF)可以與人ELISA試劑盒系統(tǒng)中的捕獲抗體及酶標記二抗的FC段直接結合,從而導致假陽性。
解決該情況的辦法是:
①用F(ab)2替代完整的IgG;
②標本用聯有熱變性(63℃,10 min)IgG的固相吸附劑處理(將熱變性IgG加入到標本稀釋液中同樣有效);③檢測抗原時,可以用2-巰基乙醇等加入到標本稀釋液中,使RF降解。
(2)補體 ELISA系統(tǒng)中固相一抗和標記二抗過程中,人ELISA試劑盒抗體分子發(fā)生變構,其FC段的補體C1q分子結合位點被暴露出來,使C1q 可以將二者連接起來,人ELISA試劑盒從而造成假陽性。解決的辦法是:①用EDTA稀釋標本;②用53℃,10 min或56℃,30 min加熱血清使C1q滅活。
(3)嗜異性抗體 人類血清中含有能與嚙齒類動物(如鼠等)Ig (s) 結合的天然嗜異性抗體,可將ELISA系統(tǒng)中一抗和二抗連接起來,也能造成假陽性。解決的辦法是:可在標本稀釋液中加入過量的動物Ig (s) ,但加入量不足或亞類不同時無效。

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